服务项目
MTT细胞增殖能力检测
服务概述
津科生物采用MTT 细胞增殖检测试剂盒，对由诱导剂和抑制剂等引起的细胞增殖活性和细胞毒性的变化，进行体外检测。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，死细胞无此功能，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。在特定溶剂存在 的情况下，甲臜可以被完全溶解。MTT细胞增殖能力检测可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。
服务周期：
技术介绍
津科生物采用MTT细胞增殖检测试剂盒，对由诱导剂和抑制剂等引起的细胞增殖活性和细胞毒性的变化，进行体外检测。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，死细胞无此功能，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。MTT细胞增殖能力检测可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。
实验步骤
- 1.所有的管子在打开之前需要先离心。
- 2.使用96孔板进行检测时，通常细胞增殖检测实验每孔加入100 μL 2000个细胞，细胞毒性检测实验每孔加入100 μL 5000 个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要，进行培养并给 予 0-10 μL 特定的药物刺激。在培养箱中孵育 24 小时。 注意事项: 每个样品建议设置 5 个复孔。
- 3.MTT 溶液的配制：用 MTT Solvent(组分 B)溶解 MTT Reagent (组分 A)，配制成 5 mg/ml 的 MTT 溶液。配制后即可使 用，或直接-20°C 避光保存，也可以根据需要适当分装后-20°C 避光保存。
- 4.每孔加入 10 μL MTT 溶液，使每个孔中的 MTT 得终浓度为 0.5 mg/ml。
- 5.轻轻混匀后，5%CO2，37℃培养箱中孵育 4 小时。 注意事项： 孵育后，蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）沉积在细胞中。
- 6.小心吸取每个孔中的培养基已防止细胞单层破裂。
- 7.每孔加入 100 μL Formazan Solubilization Solution（组分 C）
- 8.将 96 孔板放在振荡器上轻轻震荡 10 分钟，直至在普通光学显微镜下观察发现甲臜全部溶解。
- 9.在酶标免疫检测仪 570 nm 测定吸光度。
案例：实验结果展示
确定空白对照的平均值并校正吸光度值，根据化合物浓度绘制570 nm吸光度曲线，通过Prism等工具进行非线性回归分析，计算细胞增殖EC50值和细胞毒性IC50值。
