服务项目
cas9敲除稳定株构建
服务概述
基因敲除原理：gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割，引起DNA双链断裂（DSB），触发细胞自身的非同源末端修复机制（NHEJ），NHEJ修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除（Indel），造成移码突变，致使基因功能丧失，从而实现基因敲除。
服务周期：
CRISPR-Cas9敲除稳定株构建
技术介绍
基因敲除原理：gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割，引起DNA双链断裂（DSB），触发细胞的非同源末端修复机制（NHEJ）。该修复过程易产生插入或缺失突变（Indel），导致基因移码突变或功能丧失。
移码敲除：单sgRNA作用于外显子区域时，NHEJ修复产生的非3倍数Indel将导致蛋白翻译移码，无法生成完整功能蛋白。
片段敲除：双sgRNA同时诱导两个DSB，NHEJ修复可能导致基因组片段缺失及移码突变，双重破坏蛋白表达，显著增强敲除效率。
实验流程
案例：实验结果展示
客户提供
- 若无法提供载体，需明确载体类型等构建信息
- 指定用于构建的细胞系
- 其他相关实验参数（如gRNA序列、筛选标记等）
交付内容
- 定制载体及菌液（含序列验证报告）
- 基因敲除稳定细胞株（可提供Western blot/qPCR验证服务）
- 完整实验方案及试剂清单
- 技术文档（载体图谱、实验条件优化记录等）