服务项目

流式细胞凋亡
磷脂酰丝氨酸(PS)是一种带负电荷的磷脂,正常情况下主要存在于细胞膜的内面。细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,其变化之一是膜内的PS发生外翻,暴露在细胞膜外面。Annexin V是一种Ca2+依赖性的磷脂结合蛋白,对PS具有高度亲和性。因此可以通过Annexin V与PS的结合检测细胞膜是否完整,以此判断细胞凋亡。

细胞克隆形成实验
细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体 依赖性和 增殖能力两个重要性状。
MTT细胞增殖能力检测
津科生物采用MTT 细胞增殖检测试剂盒,对由诱导剂和抑制剂等引起的细胞增殖活性和细胞毒性的变化,进行体外检测。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,死细胞无此功能,在特定溶剂存在的情况下,可以被完全溶解,然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。在特定溶剂存在 的情况下,甲臜可以被完全溶解。MTT细胞增殖能力检测可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。

EdU染色检测
EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见,能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中,基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性,广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。 与BrdU方法相比,EdU检测方法无需DNA变性,无需抗原修复,无需抗原抗体反应,更简单、更灵敏、更快速、更准确,是细胞增殖检测的最佳选择。
CCK8细胞增殖能力检测
津科生物采用Cell Counting Kit-8试剂盒对细胞增殖能力进行检测,其检测原理在于,利用类似于MTT的WST-8化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,WST-8可以被细胞内脱氢酶还原成水溶性的橙黄色甲瓒化合物。甲瓒量与活细胞数量成正比,即细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。使用酶标仪在450 nm波长处测定OD值,可以间接反映活细胞的数量。
BrdU染色检测
用BrdU预处理的细胞中,BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中,而且这种置换可以稳定存在,并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后,可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记,最后用比色法或荧光的方法进行定量测定),从而判断细胞的增殖能力。

血管生成实验
血管生成(Angiogenesis)是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1-2 mm,都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。小管形成实验是测量在体外血管生成一种快速的,可量化的方法。

细胞粘附检测
细胞黏附性是维持组织结构稳定的基本条件,也是细胞运动和发挥功能的调节因素,并且对细胞的增殖、分化有重要影响。通常可分为两类,即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。机体内许多细胞,如上皮细胞,需要牢固地定在某处发挥功能;另一些细胞,如白细胞,活跃运动,就需要不断调节细胞黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。体外测定细胞粘附性实验方法的建立,为粘附分子的发现、细胞间粘附影响的研究提供了极为有效的方法。

细胞划痕迁移检测
细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

Transwell细胞迁移/侵袭能力检测
Transwell的基本原理是将Transwell小室放入培养板中,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。Transwell上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
稳定细胞株的构建
构建稳定细胞株的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选,最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

基因沉默细胞株构建
津科生物致力于提供先进和方便的RNAi相关工具,推出一系列用于目标基因沉默的shRNA/miRNA表达载体和抑制shRNA/miRNA的Sponge载体,同时提供RNA干扰慢病毒包装、基因沉默细胞系构建等服务。合生基因具有专业的技术团队和丰富的RNA干扰经验,我们提供包括shRNA/miRNA设计、慢病毒包装、阳性克隆鉴定、单克隆细胞培养、构建基因沉默细胞系在内的一站式解决方案,服务完成后,我们将交付给您指定基因沉默的单克隆细胞株及详细的鉴定报告。

cas9敲除稳定株构建
基因敲除原理:gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),触发细胞自身的非同源末端修复机制(NHEJ),NHEJ修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除(Indel),造成移码突变,致使基因功能丧失,从而实现基因敲除。
过表达细胞株构建
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。利用慢病毒的特性,将外源DNA克隆到具有某种抗性的慢病毒载体中并感染宿主细胞,利用载体中所含的抗性标志进行筛选,可得到稳定表达或沉默特定基因的细胞株。

细胞培养
细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件,将细胞从机体中取出,在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短,性状与体内相似,适用于研究。一般说来,幼稚状态的组织和细胞,如:动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。