服务项目
条件性基因敲除小鼠
服务概述
条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出floxed小鼠， 该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该目的基因表达完全正常，而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以 在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。
服务周期：
条件性基因敲除小鼠
条件性基因敲除是通过把两个LoxP位点插入到目的基因的一个或几个重要外显子的两端以制备出floxed小鼠，该floxed小鼠在与表达Cre重组酶小鼠杂交之前，该目的基因表达完全正常，而当该floxed小鼠与组织特异性表达Cre酶的小鼠进行杂交后，可以在特定的组织或细胞中敲除该基因，而该基因在其它组织或细胞表达正常。
应用
- 用于具有胚胎致死性目的基因的研究；
- 用于研究基因在特定的组织或细胞中的生理病理功能；
- 与控制Cre或Flp表达的其它诱导系统相结合，还可以对某一基因的表达同时实现在时间和空间两方面的调控。
建系原则与流程
- 嵌合体小鼠鉴定：通过毛色判断嵌合体（黑白相间），黑色占的比例越大，嵌合率越高。
- 去除抗性基因 Neo：嵌合体小鼠和全身表达Flp deleter小鼠杂交，PCR鉴定，获得去掉打靶载体中的 Neo 基因的F1 代（杂合子）。
- 筛选flox纯合子小鼠：挑选一对F1 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除Frt两个位点片段纯合子的 F2代小鼠（命名：geneflox/flox）。
※ 备注：geneflox/flox 两条染色体上都带有 loxp–gene–loxp 的模型。
※ PCR 鉴定引物设计原则：根据Frt 前后及3’arm序列设计鉴定引物鉴定Neo是否去除；根据LoxP前后设计引物鉴定LoxP。
- 组织特异性敲除模型：Geneflox/flox 小鼠与组织特异性Cre小鼠杂交，PCR 鉴定，得到敲除 gene 的杂合子F3 代小鼠。
- 筛选cKO纯合子小鼠：挑选一对F3 代小鼠进行自交，通过 PCR 鉴定筛选得到去除 gene 纯合子的 F4 代 cKO 小鼠。
※ PCR鉴定引物设计原则：根据cKO region前5’arm及3’arm基因序列设计鉴定引物鉴定是否敲除。
