服务项目

基因敲入小鼠

服务概述

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型) ;或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟 踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因,使KO/KI同时发生。

服务周期:

基因敲入

基因敲入可以在目的基因位置引入特定的突变或外源基因。比如在目的基因上引入点突变(模拟人类遗传疾病模型);或将报告基因(如EGFP,mRFP,mCherry,mYFP,或LacZ等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因来跟踪目标基因的表达。也可以用报告基因取代小鼠本身的基因,使KO/KI同时发生。

应用

  • 用于药物筛选相关研究;
  • 用于信号通路的研究;
  • 用于示踪的相关研究。

建系原则与流程

  1. 嵌合体小鼠鉴定:通过毛色判断嵌合体(黑白相间),黑色占的比例越大,嵌合率越高。
  2. 去除抗性基因 Neo:嵌合体小鼠和Flp deleter小鼠杂交,PCR鉴定,获得去掉打靶载体中的Neo基因的F1代(杂合子)。
  3. 筛选KI纯合子小鼠:挑选一对F1代小鼠进行自交,通过PCR鉴定筛选得到去除Neo的纯合子的F2代KI小鼠。

    ※ PCR鉴定引物设计原则:根据Neo基因前后设计鉴定引物,鉴定Neo基因是否去除。