服务项目
原位杂交（组织芯片）
服务概述
原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。原位杂交亦可以应用于组织芯片的检测。结果更丰富，更具有对比性。
服务周期：
原位杂交（组织芯片）技术介绍
技术原理：通过高密度组织芯片同步检测多个样本的核酸分布，结合DAB显色系统实现高通量分析。可在单张玻片上对比数十至数百个组织样本的靶基因表达差异，显著提高实验效率和数据可比性。
实验流程
- 芯片预处理：组织芯片切片经二甲苯脱蜡→梯度乙醇水化→DEPC水洗涤（全程RNase-free操作）
- 抗原修复：高压修复（pH6.0柠檬酸缓冲液，121℃ 3min）→蛋白酶K（20μg/ml）37℃消化25min
- 内源酶阻断：3% H2O2-甲醇室温阻断15min，消除过氧化物酶干扰
- 探针杂交：预杂交液封闭非特异性位点→DIG标记探针（50nM）37℃杂交16h
- 信号检测：Anti-DIG-HRP（1:500）37℃孵育→DAB显色液（0.05% DAB + 0.03% H2O2）显微镜控制显色
- 染色封片：Harris苏木素复染→梯度乙醇脱水→中性树胶封片
- 高通量分析：全玻片扫描系统（40倍物镜）自动采集图像，AI软件定量分析阳性信号强度
案例展示
结果判读
阳性判定：棕黄色颗粒定位于胞质（mRNA）或核仁（miRNA），需排除以下假阳性： 组织边缘染色（边缘效应）、 红细胞内源性过氧化物酶残留、 苏木素过度染色导致的背景干扰。
送样运输要求
- 组织芯片样本：石蜡包埋芯片块常温运输，切片需铝箔纸避光包装
- 特殊要求：含50个以上样本的芯片需标注坐标定位图
- 运输条件：环境温度≤30℃，避免阳光直射
注意事项
- 组织芯片需进行预实验确定最佳蛋白酶K消化时间（建议5-30min梯度测试）
- DAB显色需严格计时，推荐使用自动染色机保证显色一致性
- 每个芯片需设置内参对照点（如β-actin mRNA）
- 数据分析需采用病理图像分析软件（如ImageScope）进行批处理