服务项目
原位杂交（FISH双标）
服务概述
原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。 原位杂交(FISH双标)可以检测两个靶基因的共定位情况。
服务周期：
原位杂交（FISH双标）技术介绍
技术原理：通过两种不同荧光素标记的核酸探针（如FITC/Cy3）同步检测靶基因，结合DAPI核染色实现双目标共定位分析。适用于lncRNA-miRNA互作研究及染色体异常联合检测。
实验流程
- 细胞处理：细胞爬片4%多聚甲醛（DEPC配制）固定20min→0.1% Triton X-100透化5min→蛋白酶K（20μg/ml）37℃消化8min
- 探针1杂交：预杂交液（含50%甲酰胺）37℃封闭1h→Cy3标记探针1（100nM）37℃杂交16h→梯度SSC洗涤（2×→0.5×）
- 探针2杂交：预杂交液二次封闭→FAM标记探针2（80nM）37℃二次杂交→甲酰胺加强洗涤（0.1×SSC含30%甲酰胺）
- 核染色：DAPI（1μg/ml）避光染核8min→ProLong Gold抗淬灭剂封片
- 成像分析：共聚焦显微镜双通道采集（FITC 488nm/Cy3 543nm），Z轴层扫步进0.2μm
案例展示
结果判读
• MALAT1（红）：核斑定位（直径0.5-2μm）
• miR-3064-5p（绿）：胞质弥散分布
• 共定位区域：黄色叠加信号（需计算Pearson相关系数＞0.6）
• 非特异信号：细胞边缘强荧光（明场下可见划痕）
送样运输要求
- 细胞爬片：固定后浸存于防冻保存液（PBS+50%甘油），4℃避光运输≤72h
- 特殊样本：脆性染色体样本需添加秋水仙胺（0.1μg/ml）预处理
- 国际运输：干冰运输需标注UN1845危险品代码
- 生物安全：感染性样本需灭活处理并提供安全证明
注意事项
- 两次杂交需间隔彻底洗涤（0.5×SSC洗3×5min）
- 探针浓度需预实验优化（建议50-200nM梯度测试）
- 设置单染对照排除荧光通道串扰
- 成像后数据需进行反卷积处理提升分辨率