服务项目
原位杂交（FISH单标）
服务概述
原位杂交原理：原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
服务周期：
原位杂交（FISH单标）技术介绍
原位杂交原理：通过荧光标记的核酸探针与组织/细胞内靶核酸序列特异性结合，在荧光显微镜下通过特定激发波长显示目标RNA/DNA的定位。DAPI复染细胞核，适用于长链非编码RNA（如SEMA3B-AS1）及染色体端粒等研究。
实验流程（石蜡切片）
- 组织处理：4%多聚甲醛DEPC水固定6h→梯度乙醇脱水→石蜡包埋→4μm切片62℃烘烤2h
- 脱蜡修复：二甲苯Ⅰ/Ⅱ各15min脱蜡→梯度乙醇水化→柠檬酸钠（pH6.0）95℃热修复15min
- 探针杂交：蛋白酶K（20μg/ml）37℃消化25min→预杂交液封闭→FAM标记探针（100nM）37℃过夜杂交
- 信号强化：2×SSC→1×SSC→0.5×SSC梯度洗涤（含0.1% Tween-20）
- 成像处理：DAPI染核8min→抗淬灭剂封片→荧光显微镜采集（FAM通道：激发465-495nm/发射515-555nm）
案例展示
结果判读
阳性信号：FAM标记探针显示绿色荧光颗粒（胞质/核仁），Cy3标记探针显示红色点状信号（端粒）。需排除以下非特异信号：
① 组织自发荧光（均匀弥散）
② 探针非特异结合（阴性对照无信号）
③ 切片折叠伪影（明场下可见折痕）
送样运输要求
- 石蜡样本：4%多聚甲醛固定后常温运输，切片密封避光保存
- 冰冻样本：OCT包埋块干冰运输，切片浸存固定液4℃运输
- 细胞爬片：固定15min后密封湿盒，4℃维持≤72小时
- 特殊要求：端粒探针样本需避免反复冻融
注意事项
- 探针工作液需含50%甲酰胺以提高杂交特异性
- 端粒检测需同步设置正常组织对照判断信号强度
- 荧光显微镜需定期校准汞灯强度及滤光片透光率
- 存档图像需保存原始未压缩格式（如.nd2/.czi）