服务项目
探针设计合成
服务概述
根据提供的基因序列，采用寡核苷酸设计软件，设计出候补探针序列，经数据库比对后，判断特异性合格后，按序列合成出对应的核酸序列并标记特定的标记物。
服务周期：
技术介绍
基于目标基因序列，通过寡核苷酸设计软件筛选候选探针，经NCBI等数据库进行同源性比对验证特异性。合格序列通过化学合成法生成带标记物（如地高辛、荧光素）的核酸探针，确保探针与靶序列的特异性结合能力。
实验流程
- 1.1 设计
使用Oligo7、Primer Premier等软件设计50-80bp探针序列，Tm值控制在60-80℃，GC含量40-60%，避免发夹结构及二聚体形成。 - 1.2 合成
采用固相亚磷酰胺三酯法，依次进行：
① 脱保护（三氯乙酸去除DMT基团）
② 耦连（活化核苷酸与载体连接）
③ 加帽（乙酸酐封闭未反应位点）
④ 氧化（碘溶液稳定磷酸三酯键） - 1.3 氨解
浓氨水55℃反应16小时，裂解CPG载体并去除碱基保护基团（苯甲酰基/异丁酰基）。 - 1.4 纯化
HPLC纯化系统（C18反相柱），流动相为0.1M TEAA/乙腈梯度，收集260nm主峰。 - 1.5 质检
质谱检测分子量误差≤0.1%，纯度＞90%（A260/A280比1.8-2.0）。 - 1.6 定量分装
NanoDrop测定浓度（OD值=1对应33μg/ml），冻干后-20℃避光保存。
案例展示
结果判读
合格探针需满足：质谱主峰分子量与理论值误差≤0.1%，HPLC纯度≥90%，终浓度标注误差±10%。不合格探针需重新合成纯化。
送样运输要求
- 冻干粉态：4℃冰袋运输（有效期12个月）
- 溶液状态：-20℃干冰运输（有效期3个月）
注意事项
- 探针设计需避开SNP位点及重复序列区域
- 修饰标记需在合成前确定连接位置（5'/3'/内部）
- 冻干粉复溶需使用无核酸酶的超纯水
- 避免反复冻融，建议分装为单次使用量