服务项目

AgNOR染色

服务概述

细胞核核仁组织区即参与形成核仁的染色质区,其含有酸性非组蛋白类蛋白质,对银有较高的亲和力。也称嗜银蛋白。这些AgNOR参与核糖体基因RNA的转录,与核糖体的形成和蛋白质的合成密切相关。其数量和形状反应细胞的增殖活性,可用以鉴别正常细胞核肿瘤细胞。

服务周期:

技术介绍

细胞核核仁组织区即参与形成核仁的染色质区,其含有酸性非组蛋白类蛋白质,对银有较高的亲和力。也称嗜银蛋白。这些AgNOR参与核糖体基因RNA的转录,与核糖体的形成和蛋白质的合成密切相关。其数量和形状反应细胞的增殖活性,可用以鉴别正常细胞核肿瘤细胞。

实验流程

脱蜡至水→固定→梯度乙醇复水→1%DTT孵育→水洗→滴加染液孵育→水洗→5%硫代硫酸钠孵育→水洗→0.01%番红复染(非必需步骤)→脱水封片→显微镜镜检

实验步骤:

1. 石蜡切片脱蜡至水:二甲苯Ⅰ/Ⅱ各20min→梯度乙醇复水(100%→95%→80%→70%)
2. 固定:4%中性甲醛固定15min
3. 预处理:1%DTT溶液(pH 7.4)37℃孵育30min
4. 银染:新鲜配制AgNO3染液(50%硝酸银溶液)避光染色45min(60℃)
5. 终止反应:5%硫代硫酸钠处理5min
6. 复染:0.01%番红精染液复染1min(选择性步骤)

案例:实验结果展示

结果判读:

核仁内黑色颗粒为AgNOR阳性信号,正常细胞核内颗粒数≤5个/核,恶性肿瘤细胞颗粒数≥8个/核。颗粒融合成团块状提示高增殖活性。

送样运输要求:

1. 样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。
(切勿固定时间超过72h,禁止冷冻结冰)
2. 石蜡切片常温运输,冰冻切片需-20℃干冰运输

注意事项:

1. 硝酸银染液必须现用现配,避光操作
2. DTT溶液需调整至pH 7.4±0.1(pH偏差会导致染色失败)
3. 染色温度严格控制在60±1℃(温度过高易产生背景沉淀)