服务项目
拍照（荧光）
服务概述
荧光显微镜是免疫荧光的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。正置显微镜型号：NIKON Eclipse ci;软件：NIS_F_Ver43000_64bit_E;成像系统：NIKON digital sight DS-FI2。可选择100×、200×和400×不同放大倍数。共配置红、绿、蓝三个通道：DAPI(EX激发340-380,BA发射435-485);FITC(EX激发465-495,BA发射515-555);G-2A(EX激发510-560,BA发射590)
服务周期：
荧光显微成像技术介绍
技术原理：基于NIKON Eclipse ci荧光系统，配备三通道滤光模块：
• DAPI通道（激发340-380nm/发射435-485nm，蓝色）
• FITC通道（激发465-495nm/发射515-555nm，绿色）
• TRITC通道（激发510-560nm/发射590nm，红色）
支持多标记样本的共定位分析，最小可检测荧光强度≥500光子/像素/秒。
实验流程
- 样本前处理：接收抗淬灭剂封片样本（ProLong Diamond），切片厚度≤8μm
- 光路校准：汞灯预热30min，各通道曝光时间优化（DAPI 50ms/FITC 200ms/TRITC 300ms）
- 图像采集：40×物镜（NA 0.95）拍摄Z-stack（层厚0.5μm），NIS-Elements自动生成最大强度投影
- 数据输出：合并图像（Merge）+单通道原图（16bit TIFF），元数据包含荧光探针参数
案例展示
结果判读
送样运输要求
- 专用避光运输盒（内置干燥剂，湿度＜40%）
- 荧光样本需标注光敏感等级（1级：可耐受室内光；3级：全程避光）
- 运输温度4-25℃，避免冷冻导致封片剂开裂
注意事项
- 100×油镜需使用非硬化浸油（折射率n=1.518）
- TIFF格式保留完整元数据（含曝光时间/增益值）
- 通道串扰率控制：DAPI→FITC＜0.5%，FITC→TRITC＜1.2%
- 默认提供3视野/样本，需特殊区域拍摄需提供标记图