服务项目
免疫组化（大组织）
服务概述
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。传统的石蜡切片由于玻片的限制，大组织的形态结构不能完整的呈现在镜下，特制大玻片和全景数字扫描可以很好的解决这一难题。
服务周期：
技术介绍
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。传统的石蜡切片由于玻片的限制，大组织的形态结构不能完整的呈现在镜下，特制大玻片和全景数字扫描可以很好的解决这一难题。
实验流程
- 切片脱蜡至水-抗原修复-3%的双氧水处理-画圈-血清封闭-一抗4℃过夜孵育-二抗室温孵育-显色-苏木素染核-脱水、透明、封片-镜检
实验步骤
步骤1：抗原修复优化
高压修复罐内预加pH9.0 EDTA缓冲液，121℃修复20分钟，自然冷却至室温
步骤2：抗体孵育
GFAP一抗（1:200）4℃振荡孵育16小时→HRP二抗（1:500）37℃孵育45分钟
步骤3：显色控制
DAB显色液作用3-5分钟（显微镜实时监控），苏木素复染30秒分化返蓝
案例：实验结果展示
猴脑IHC-GFAP_0.2x
猴脑IHC-GFAP_10.0x
猴脑IHC-GFAP_20.0x
结果判读
- 阳性定位：细胞质棕黄色颗粒（DAB），细胞核蓝色（苏木素）
- 定量标准：阳性细胞占比＞5%且染色强度≥2+（四分级法）
- 背景控制：非特异性染色面积＜2%视为合格
送样运输要求
- 样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。
- 切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
注意事项
- 超大玻片需用硅烷化处理防止脱片
- 一抗孵育时需平缓振荡（60rpm）增强渗透
- DAB显色需分区域梯度监控防止过显
- 扫描参数：40倍物镜，分辨率0.23μm/pixel