服务项目
免疫荧光(双标,组织芯片)
服务概述
组织芯片免疫荧光染色,是将许多不同处理的组织以规则的微阵列方式排列于同一载体上,同时进行相同指标的免疫荧光检测。
服务周期:
技术介绍
组织芯片免疫荧光染色,是将许多不同处理的组织以规则的微阵列方式排列于同一载体上,同时进行相同指标的免疫荧光检测。
实验流程
1. 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2. 抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)
3. 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
4. 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。
5. DAPI复染细胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
6. 封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7. 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
实验步骤
案例:实验结果展示
结果判读
送样运输要求
1. 组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上,常温运输送样。
3. 石蜡切片常温保存运输。