鬼笔环肽染色

技术介绍

鬼笔环肽(phalloidin)可特异性与细胞内聚合微丝中的丝状肌动蛋白F-actin结合，通过藕联的荧光素分子，从而显示微丝骨架在细胞中的分布。与抗体相比，鬼笔环肽无物种限制，染色特异性极强，染色区和未染色区对比性非常清晰，而且标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持。也适用于甲醛固定和去垢剂通透处理后的组织或细胞样本。

实验流程

1. 细胞固定并破膜：
   • 培养好的细胞爬片倒去培养基，用PBS洗；
   • 4%多聚甲醛固定30min，PBS洗3次，每次5min；
   • 滴加0.1%TRITON，破膜20min。
2. 加鬼笔环肽：
   • 爬片稍甩干后用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈（防止液体流走）；
   • 加50-100μl鬼笔环肽工作液，室温孵育2h；
   • PBS洗3次，每次5min。
3. DAPI复染细胞核：
   • 爬片用PBS(PH7.4)洗涤3次，每次5min；
   • 去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

实验步骤

1. 细胞固定并破膜：
   • 培养好的细胞爬片倒去培养基，用PBS洗；
   • 4%多聚甲醛固定30min，PBS洗3次，每次5min；
   • 滴加0.1%TRITON，破膜20min。
2. 加鬼笔环肽：
   • 爬片稍甩干后用组化笔在盖玻片中间细胞分布均匀的位置画圈（防止液体流走）；
   • 加50-100μl鬼笔环肽工作液，室温孵育2h；
   • PBS洗3次，每次5min。
3. DAPI复染细胞核：
   • 爬片用PBS(PH7.4)洗涤3次，每次5min；
   • 去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。

案例：实验结果展示

结果判读

送样运输要求

• 固定好细胞，换成PBS，4℃运输到实验室；
• 目前只接受细胞爬片。

注意事项

• 注意细胞核的分化程度；
• 注意苏木素和伊红的效价，及时更换染液；
• 染色全程避光操作；
• 鬼笔环肽工作液需-20℃避光保存。