服务项目
Brdu染色
服务概述
可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)，渗入正在复制的DNA分子，活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色。
服务周期：
Brdu检测技术
技术介绍
Brdu（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）可替代胸腺嘧啶掺入DNA合成期（S期），通过活体注射或细胞培养添加标记增殖细胞，利用抗Brdu单克隆抗体进行ICC染色，支持与其他标记物（如NeuN/GFAP）双重染色分析细胞分化状态。
实验流程
■ 细胞样本处理流程
- 0.5% Triton X-100破膜20min（室温）
- DAPI染核8min（避光）
- 4%多聚甲醛固定10min
- 2M HCl（1:7稀释）37℃处理30min
- 二次固定（4%多聚甲醛10min）
- 3% BSA封闭→一抗4℃过夜→PBS洗3×5min
- 二抗室温50min→PBS洗3×5min
- 抗淬灭封片剂封片
■ 组织样本处理流程
按常规免疫荧光步骤操作，无需HCl处理。
案例：实验结果展示
结果判读
- 阳性信号：细胞核内红色荧光（Cy3标记）
- 定量分析：每视野Brdu+细胞数/总细胞数×100%
- 共定位分析：与细胞特异性标记物（如Nestin）共染确认干细胞增殖
送样运输要求
- 新鲜组织：20倍体积4%PFA固定＞24h，常温运输
- 石蜡切片：切片盒常温运输
- 冰冻切片：-20℃干冰运输
- 细胞爬片：固定后湿盒4℃运输
- ※ 禁止样本冻融或固定超过72h
注意事项
- HCl浓度与时间需精确控制（浓度过高或时间过长会导致DNA过度变性）
- 一抗建议使用小鼠抗Brdu单克隆抗体（Clone: Bu20a）
- 封片后样本需避光-20℃保存，1周内完成成像