服务项目
TUNEL（组织芯片）检测
服务概述
晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下，将带有荧光素分子的dUTP标记到DNA的3'-末端，然后通过荧光显微镜观察、或进而用带有HRP的一抗染色后DAB显色，可以进行凋亡细胞的检测，该实验称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
服务周期：
1-2周
技术介绍
晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下，将带有荧光素分子的dUTP标记到DNA的3'-末端，然后通过荧光显微镜观察、或进而用带有HRP的一抗染色后DAB显色，可以进行凋亡细胞的检测，该实验称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
实验流程与步骤
1. 样本预处理
- 石蜡切片：二甲苯梯度脱蜡（15min×2次）→乙醇梯度水化（100%→75%）→蛋白酶K修复（20μg/mL，37℃ 30min）。
- 组织芯片：需确保芯片受体蜡块平整，组织点排列紧密。
2. 破膜与通透
0.1% Triton X-100室温处理20min→PBS洗涤3次（每次5min）。
3. TUNEL反应
按试剂盒比例配制反应液（TdT酶:荧光标记液=2:29），覆盖组织后37℃避光孵育1-2小时。
4. 复染与封片
DAPI染核（5-10min）→抗荧光淬灭封片剂封片→4℃避光保存。
案例
案例：子宫组织芯片检测
结果判读
- 阳性信号:绿色荧光（FITC）与DAPI核染色共定位；
- 阴性对照：不加TdT酶时无绿色荧光；
- 定量分析：使用ImageJ统计阳性细胞占比（凋亡率=绿色荧光面积/总核面积×100%）。
送样运输要求
- 石蜡切片：常温密封运输，避免高温潮湿。
- 冰冻切片：-20℃干冰运输，避免反复冻融。
- 细胞爬片：4%多聚甲醛固定后4℃保存≤48小时。
注意事项
- 避免假阳性：蛋白酶K处理时间不超过30min，过度消化会破坏组织结构。
- 背景控制：内源性过氧化物酶需3% H₂O₂封闭20min（DAB显色法）。
- 荧光稳定性：封片后24小时内完成拍摄，避光保存。
- 组织芯片质控：芯片制作时需确保组织点高度一致，避免切片皱褶或脱落。