服务项目
TUNEL（细胞芯片）检测
服务概述
晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下，将带有荧光素分子的dUTP标记到DNA的3'-末端，然后通过荧光显微镜观察、或进而用带有HRP的一抗染色后DAB显色，可以进行凋亡细胞的检测，该实验称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
服务周期：
1-2天
技术介绍
TUNEL（Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling）晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下，将带有荧光素分子的dUTP标记到DNA的3'-末端，然后通过荧光显微镜观察、或进而用带有HRP的一抗染色后DAB显色，可以进行凋亡细胞的检测，该实验称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
实验流程
- 脱蜡至水--蛋白酶K修复--破膜通透--孵育tunel反应液--DAPI染核--抗荧光素淬灭剂封片-- 镜检--扫描
实验步骤：
- 1.样本固定 细胞芯片处理：4%多聚甲醛室温固定30分钟→PBS洗涤3次（每次5分钟）。
- 2.蛋白酶K修复 滴加蛋白酶K工作液（原液:PBS=1:9）覆盖组织，37℃孵育20-30分钟→PBS洗涤3次。
- 3.破膜通透 0.1% Triton X-100处理20分钟→PBS洗涤3次（可选步骤，需根据样本类型调整）。
- 4.TUNEL反应液配制与孵育 TdT酶:dUTP:Buffer按2:29:50比例混合（现用现配），滴加至样本→37℃避光孵育1-2小时→PBS洗涤3次。
- 5.信号放大（DAB显色，可选） （若使用HRP标记）Streptavidin-HRP（1:200稀释）37℃孵育30分钟→PBS洗涤→DAB显色（显微镜下控制至棕黄色信号出现）。
- 6.API核复染 滴加DAPI工作液（1μg/mL）避光染色5分钟→PBS洗涤3次。
- 7.封片与镜检 抗荧光淬灭封片剂封片→荧光显微镜观察（FITC绿光激发波长465-495nm，DAPI蓝光330-380nm）。
案例
TUNEL(细胞芯片) --人源细胞：
结果判读
- 阳性信号：细胞核绿色荧光（FITC标记），提示DNA断裂；
- 阴性对照：仅显示蓝色DAPI染色（需省略TdT酶）；
- 定量分析：通过图像分析软件（如ImageJ）计算凋亡细胞占比。
送样运输要求
- 石蜡切片：常温密封避光运输；
- 冰冻切片：-20℃干冰保存；
- 细胞芯片：4%多聚甲醛固定后4℃保存。
注意事项
- 防脱片处理：使用聚-L-赖氨酸包被载玻片，控制细胞密度避免过度凋亡；
- 优化通透：蛋白酶K浓度与时间需根据切片厚度调整（4μm切片10 min，30μm切片30 min）；
- 背景控制：DAB显色需实时监控（≤30 min），充分洗涤（PBS 5次）减少非特异性信号；
- 对照设置：必设阴性对照（无TdT酶）和阳性对照（DNase I处理）。