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产品分类

荧光定量PCR(RT-pcr)

技术介绍

荧光定量PCRReal-time Quantitative PCR)PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,最终通过相对定量或***定量的方法确定各个样本的本底表达量。可以用于检测mRNA、lncRNA、miRNA、circRNA的基因表达水平。

 


实验流程




实验步骤


1、样本RNA提取

2、RNA质量质检(浓度测序,纯度检测)

3、样本cDNA合成

4、梯度稀释的标准品及待测样本的管家基因实时定量PCR;

5、制备用于绘制梯度稀释标准曲线的DNA模板

6、待测样本的待测基因实时定量PCR

7、数据分析


案例:实验结果展示


1、电泳图

 

2、扩增曲线

3、溶解曲线


送样及交付标准



1)已知的基因序列或引物序列
2)引物:20个50μl PCR体系用量
3)提供样品
基因组DNA、cDNA或质粒模板:>5μg/样品;
动物组织:不少于200 mg;
动物细胞:细胞数不少于107
 以上;

菌样:饱和浓度样品不少于1 ml,其它菌样不少于106 个菌;

土壤淤泥样:不少于100 g 样品;

血液样:全血不少于300 μl;
植物根茎叶等组织:不少于500 mg 。


交付标准



服务项目

说明

RNA提取

提供电泳图片、浓度及纯度值。

RNA提取+反转录

RNA提供电泳图片、浓度、纯度值。

DNA提取

样本可为血液、细菌、真菌、动植物和特殊样品(如石蜡样、水样、土壤等),提供电泳图片、浓度及纯度值。

PCR扩增

以DNA为模板进行扩增,用于目的基因的获取、序列分析或基因多态性分析

RT-PCR扩增

以cDNA为模板进行扩增,用于目的基因的获取或序列分析

 


RT-PCR(荧光定量PCR)
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