图片展示
搜索

咨询热线:400-669-2220 

图片展示
产品分类

Cas9敲除稳定株构建

技术介绍


基因敲除原理:gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),触发细胞自身的非同源末端修复机制(NHEJ),NHEJ修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除(Indel),造成移码突变,致使基因功能丧失,从而实现基因敲除。

当使用一条sgRNA在蛋白编码基因的外显子内产生DSB时,若NHEJ修复导致了缺口处产生了非3倍数的indels,则会造成蛋白翻译时的读码框移码(Framshift),不再产生完整的蛋白,即“移码敲除”。当使用两条sgRNA同时作用造成两个DSB时,NHEJ修复不但可造成染色体DNA片段的缺失,同时也可能造成读码框移码。这种基因组的双重修饰更强有力地破坏了编码蛋白的表达,即“片段敲除”。

 


实验流程


细胞分型——细胞预实验——gRNA设计——CRISPR/Cas9载体构建——gRNA靶点活性检测——基因敲除细胞系构建——基因型鉴定

  


案例:实验结果展示



(双gRNA慢病毒表达载体)

 


客户提供


1. 如客户不能提供载体的,需提供载体构建所需的相关信息,如载体类型等;

2. 构建稳定细胞株所需细胞系的选择;

3. 与构建稳定细胞株相关的其他信息。


交付内容


1. 本公司构建载体的,提供载体及带有载体的菌液各一份及相关的序列信息;

2. 构建成功的稳定细胞株,转染后需要检测的,参考相关实验服务;

3. 构建稳定细胞株实验所需试剂耗材、仪器设备、实验方法各一份;

4. 其他与构建稳定细胞株相关的信息。

 

 

 

 


Cas9敲除稳定株构建
长按识别二维码查看详情
长按图片保存/分享

 

 

公司地址:天津市西青区海泰华科8路滨海中关村5楼E区

联系电话:400-669-2220 

公司邮箱:genink@163.com   genink@126.com

 

copyright ©2015-2025    天津津科生物科技有限责任公司

ICP备案/许可证编号:津ICP备19000762号-1      津公网安备 12011102001172号

 

在线客服
联系方式
二维码
置顶
联系方式
热线电话
400-669-2220
上班时间
周一到周五
二维码
二维码
添加微信好友,详细了解产品
使用企业微信
“扫一扫”加入群聊
复制成功
添加微信好友,详细了解产品
我知道了