津科生物采用MTT 细胞增殖检测试剂盒，对由诱导剂和抑制剂等引起的细胞增殖活性和细胞毒性的变化，进行体外检测。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，死细胞无此功能，在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解，然后通过酶标仪可以测定570 nm波长附近的吸光度。在特定溶剂存在的情况下，甲臜可以被完全溶解。MTT细胞增殖能力检测可以用于一些生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞毒性测定等。

实验步骤

1. 所有的管子在打开之前需要先离心。

2. 使用96孔板进行检测时，通常细胞增殖检测实验每孔加入100 μL 2000个细胞，细胞毒性检测实验每孔加入100 μL 5000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。按照实验需要，进行培养并给予0-10 μL特定的药物刺激。在培养箱中孵育24小时。注意事项: 每个样品建议设置5个复孔。

3. MTT溶液的配制：用MTT Solvent（组分B）溶解 MTT Reagent （组分A），配制成5mg/mL的MTT溶液。配制后即可使用，或直接-20°C避光保存，也可以根据需要适当分装后-20°C避光保存。

4. 每孔加入10μL MTT 溶液，使每个孔中的MTT的终浓度为0.5mg/ml。

5. 轻轻混匀后，5% CO₂，37℃培养箱中孵育4小时。注意事项：孵育后，蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）沉积在细胞中。

6. 小心吸取每个孔中的培养基已防止细胞单层破裂。

7. 每孔加入100μL Formazan Solubilization Solution（组分C）

8. 将96孔板放在振荡器上轻轻震荡10分钟，直至在普通光学显微镜下观察发现甲臜全部溶解。

9. 在酶标免疫检测仪570nm测定吸光度。

案例：实验结果展示

确定空白对照的平均值，并从所有吸光度值中减去此值。根据测试化合物的浓度，在570nm处绘制校正后的吸光度值。利用Prism或其他数据分析工具，通过非线性回归分析确定细胞增殖的EC50值和细胞毒性化合物的IC50值。

客户提供

1、实验信息，包括细胞类型，细胞处理药物和条件。

2、实验结果要求等。

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