图片展示
搜索

咨询热线:400-669-2220 

图片展示
产品分类

免疫组化

技术介绍

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。


实验流程

切片脱蜡至水-抗原修复-3%的双氧水处理-画圈-血清封闭-一抗4℃过夜孵育-二抗室温孵育-显色-苏木素染核-脱水、透明、封片-镜检


实验步骤

1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ 15min-二甲苯III 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

2、 抗原修复:组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液(PH6.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸,停火8min保温再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

3、 阻断内源性过氧化物酶:切片放入3%双氧水溶液,室温避光孵育25 min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

4、 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织,室温封闭30min。(一抗是山羊来源的用兔血清封闭,其他来源的用BSA封闭)

5、 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

6、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min。

7、 DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。

8、 复染细胞核:苏木素复染3min左右,自来水洗,苏木素分化液分化数秒,自来水冲洗,苏木素返蓝液返蓝,流水冲洗。

9、 脱水封片:将切片依次放入75%酒精5min--85%酒精5min --无水乙醇Ⅰ 5min --无水乙醇Ⅱ 5min--正丁醇5min--二甲苯Ⅰ 5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。

10、显微镜镜检,图像采集分析。


案例:实验结果展示