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双荧光素酶报告基因检测
技术简介
荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪（化学发光仪）测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，以其中一个作为内参对照，即表达量基本恒定，用于减少试验中不同处理间所固有的变化，包括培养细胞的数目及活力的差异，细胞转染及裂解的效率，而另外一个荧光素酶则作为报告基因，用于指示不同处理条件下基因的表达情况。
实验流程
实验步骤
1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因Luc/Rluc的重组质粒；
2、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，通常24-48h；（选择转染效率较高的HEK-293T细胞或原代细胞等）
3、细胞处理: 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；
4、荧光检测: 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测
5、数据分析
案例：实验结果展示
miRNAs 与靶基因的3' UTR区域特异结合后调节靶基因的表达。当3' UTR靶标序列融合在一个荧光素酶报告基因下游并在体外表达时，miRNA通过与下游3' UTR特异结合从而调节荧光素酶的表达。***，通过分析荧光素酶的活性，间接了解miRNA的靶标调控作用和特异性。
送样要求及结果交付
客户提供 | 基因模板，需提供详细的转录因子、目的基因或microRNA信息； |
| 实验细胞，如无特殊要求，津科默认为使用293T细胞，则无需提供。 | |
最终交付 | 实验流程及完整报告一份，包括实验原始数据、图片、分析结果等。 |
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