荧光素酶报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪(化学发光仪)测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。常见的组合是萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶,以其中一个作为内参对照,即表达量基本恒定,用于减少试验中不同处理间所固有的变化,包括培养细胞的数目及活力的差异,细胞转染及裂解的效率,而另外一个荧光素酶则作为报告基因,用于指示不同处理条件下基因的表达情况。
1、重组质粒制备: 制备含有待检测基因Luc/Rluc的重组质粒;
2、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染,通常24-48h;(选择转染效率较高的HEK-293T细胞或原代细胞等)
3、细胞处理: 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作;
4、荧光检测: 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测
5、数据分析
miRNAs 与靶基因的3' UTR区域特异结合后调节靶基因的表达。当3' UTR靶标序列融合在一个荧光素酶报告基因下游并在体外表达时,miRNA通过与下游3' UTR特异结合从而调节荧光素酶的表达。***,通过分析荧光素酶的活性,间接了解miRNA的靶标调控作用和特异性。
客户提供 | 基因模板,需提供详细的转录因子、目的基因或microRNA信息; |
实验细胞,如无特殊要求,津科默认为使用293T细胞,则无需提供。 | |
最终交付 | 实验流程及完整报告一份,包括实验原始数据、图片、分析结果等。 |